การทดสอบ ELISA ตรวจพบโรคต่างๆซึ่งเป็นสาเหตุที่พบว่ามีการประยุกต์ใช้อย่างกว้างขวางในทางการแพทย์และอื่น ๆ อย่างไรก็ตามการทดสอบ ELISA เป็นที่รู้จักกันดีในการวินิจฉัยโรค Lyme การทดสอบ ELISA คืออะไร? จะแปลผลอย่างไร? ราคาของการทดสอบคืออะไร?
สารบัญ:
- การทดสอบ ELISA - ตรวจจับอะไร? การประยุกต์ใช้การทดสอบ ELISA
- การทดสอบ ELISA - การทดสอบคืออะไร?
- การทดสอบ ELISA และโรค Lyme - ควรดำเนินการเมื่อใด
- การทดสอบ ELISA - ราคา การทดสอบ ELISA มีค่าใช้จ่ายเท่าไร?
- การทดสอบ ELISA - ผลลัพธ์ เป็นผลบวกลวงได้หรือไม่?
- การทดสอบ ELISA - ผลลัพธ์ พวกเขาสามารถลบเท็จได้หรือไม่?
การทดสอบ ELISA คือการทดสอบภูมิคุ้มกันที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์เป็นวิธีการทางห้องปฏิบัติการที่ใช้กันทั่วไปซึ่งทำหน้าที่อื่น ๆ สำหรับการตรวจหาปริมาณแอนติบอดีในเลือด
ด้วยเหตุนี้การทดสอบ ELISA จึงพบการประยุกต์ใช้ในการวินิจฉัยโรคจากแบคทีเรียเช่น Lyme borreliosis
ข้อได้เปรียบของวิธี ELISA คือความเรียบง่ายและความเป็นไปได้ในการใช้งานที่รวดเร็วรวมถึงความไวสูง วิธี ELISA ดำเนินการโดยใช้แผ่นพลาสติกพิเศษที่มีหลุมซึ่งเต็มไปด้วยเช่นโปรตีน Borrelia (แอนติเจน) และโมโนโคลนอลแอนติบอดีจำเพาะซึ่งออกแบบมาเพื่อตรวจหาแอนติบอดีในตัวอย่างของผู้ป่วย
การทดสอบ ELISA - ตรวจจับอะไร? การประยุกต์ใช้การทดสอบ ELISA
ความไวสูงและความเรียบง่ายของวิธี ELISA ทำให้สามารถใช้ในการวินิจฉัยโรคได้หลายชนิด แต่เป็นที่รู้จักกันดีว่าเป็นวิธีการวินิจฉัยโรค Lyme
ในกรณีของการวินิจฉัย Lyme borreliosis สิ่งที่เรียกว่า ELISA ทางอ้อมซึ่งอนุญาตให้ตรวจจับ IgM หรือ IgG ที่เฉพาะเจาะจงในวัสดุที่ทดสอบ ในทำนองเดียวกันสามารถตรวจพบแอนติบอดีเพื่อวินิจฉัย:
- การติดเชื้อไวรัส: herpesviruses (เริม, เริมงูสวัด, Epstein-Barr, cytomegalovirus), HIV, ไวรัสตับอักเสบ (HBV และ HCV)
- การติดเชื้อโปรโตซัว: toxoplasmosis, giardiasis
- โรคแพ้ภูมิตัวเอง: โรค celiac (แอนติบอดี anti-tTG หรือ anti-DPG), โรค Hashimoto (แอนติบอดีต่อต้าน TG และ anti-TPO), โรคลำไส้อักเสบ (anti-ASCA และ anti-ANCA antibodies)
- โรคพยาธิและโรคภูมิแพ้ซึ่งตรวจพบแอนติบอดี IgE เฉพาะ ระดับที่เพิ่มขึ้นอาจบ่งบอกถึงการมีอาการแพ้เช่นเกสรดอกไม้และอาหารหรือการติดเชื้อปรสิต (พยาธิตัวตืดติดอาวุธพยาธิตัวกลมของมนุษย์)
นอกจากนี้ยังมีการปรับเปลี่ยนวิธี ELISA (ที่เรียกว่าแซนวิช ELISA) ซึ่งอนุญาตให้ตรวจจับตัวอย่างโปรตีนอื่นที่ไม่ใช่แอนติบอดี จากนั้นจุดมุ่งหมายของการทดสอบคือการตรวจหาวัสดุชีวภาพ:
- ชิ้นส่วนของไวรัสหรือแบคทีเรียส่วนใหญ่มักเป็นแอนติเจนที่มีลักษณะเฉพาะของเชื้อโรคที่กำหนด
- ฮอร์โมนในซีรัมเช่นฮอร์โมนเอสโตรเจนโปรแลคติน TSH fT4 คอร์ติซอล
- เอนไซม์เช่น calprotectin, pancreatic elastase, alkaline phosphatase
- สารบ่งชี้มะเร็งเช่น CA-125
- การปรากฏตัวของยาในซีรั่ม
วิธีนี้ยังใช้ได้ในอุตสาหกรรมอาหารซึ่งสามารถตรวจหาร่องรอยของสารก่อภูมิแพ้ (เช่นนมถั่วลิสง) จีเอ็มโอหรือสารพิษในอาหาร
การทดสอบ ELISA - มันเกี่ยวกับอะไร?
ตัวอย่างเช่นการวินิจฉัยโรค Lyme โดยใช้วิธี ELISA ประกอบด้วยการตรวจหาโปรตีนภูมิคุ้มกันในวัสดุชีวภาพ - แอนติบอดีที่เกิดขึ้นระหว่างการตอบสนองต่อแอนติเจนของ Borrelia
แอนติบอดีได้รับการทดสอบในสองชั้นคือ IgM และ IgG IgM เป็นแอนติบอดีชนิดแรกที่ปรากฏในร่างกายเมื่อสัมผัสกับแบคทีเรียและจะลดลงเมื่อเวลาผ่านไป
สถานที่ของพวกเขาถูกยึดโดยแอนติบอดี IgG แบบถาวรซึ่งสามารถอยู่ในร่างกายได้นานหลายสิบปี
ด้วยวิธีนี้การปรากฏตัวของแบคทีเรียในร่างกายจะได้รับการทดสอบทางอ้อมโดยการตรวจหาแอนติบอดีที่มุ่งเน้นเฉพาะกับ Borrelia spirochetes
แอนติบอดีในขั้นตอนต่างๆของการติดเชื้ออาจถูกนำไปต่อต้านโปรตีน Borrelia หลายชนิด ตัวอย่างเช่นในระยะแรกคือโปรตีน p41
ในระยะหลังเริ่มปรากฏโปรตีนมากขึ้นเช่น p21, p30, p39, p43 นี่คือสาเหตุที่การวินิจฉัยโรคลายม์เป็นเรื่องยากมาก
การเลือกโปรตีนของแบคทีเรียมีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการทดสอบเพื่อให้มีค่าการวินิจฉัยสูง ดังนั้นในการวินิจฉัยโรค Lyme เป็นประจำควรใช้การทดสอบ ELISA รุ่น II หรือ III รุ่นที่เลือกโปรตีนชุดเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่น่าเชื่อถือที่สุด
การทดสอบ ELISA และโรค Lyme ทำเมื่อไหร่?
Lyme borreliosis เป็นโรคแบคทีเรียที่เกิดจากแบคทีเรีย Borrelia burgdorferi และหลายพันธุ์
การวินิจฉัยโรคไม่ใช่เรื่องง่ายเนื่องจากความซับซ้อนของการตอบสนองของภูมิคุ้มกันต่อบอร์เรเลียและความไม่สมบูรณ์ของวิธีการทางห้องปฏิบัติการ
วิธีการตรวจทางห้องปฏิบัติการที่ใช้บ่อยที่สุดคือวิธี ELISA ที่มีความไวสูงซึ่งตรวจจับแอนติบอดีจำเพาะที่สร้างขึ้นเพื่อต่อต้านโปรตีนของแบคทีเรีย
ในการวินิจฉัย Lyme borreliosis จะใช้วิธี ELISA ทางอ้อมซึ่งมีการแยกแยะขั้นตอนต่อไปนี้:
- การบ่มหลุมบนแผ่นด้วยวัสดุที่รวบรวมจากผู้ป่วยเช่นซีรั่ม หากมีแอนติบอดีต่อ Borrelia ในวัสดุที่ทดสอบพวกมันจะจับกับโปรตีนที่ด้านล่างของปฏิกิริยาได้ดี
- จากนั้นซีรั่มส่วนเกินจะถูกล้างออกด้วยน้ำยาซักผ้าพิเศษ (บัฟเฟอร์) และสิ่งที่เรียกว่า คอนจูเกตซึ่งเป็นแอนติบอดีที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ที่จับกับแอนติบอดีที่เชื่อมโยงก่อนหน้านี้ในหลุมปฏิกิริยา
- จากนั้นสารตั้งต้นสำหรับคอนจูเกตจะถูกเพิ่มและปฏิกิริยาสีเกิดขึ้น (ผลบวก) หรือไม่มีปฏิกิริยาสี (ผลลบ)
- ขั้นตอนสุดท้ายคือการอ่านโดยผู้อ่าน (เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์) ของความเข้มข้นของแอนติบอดีต่อ Borrelia ในซีรั่มของผู้ป่วย
การทดสอบ ELISA สำหรับโรค Lyme ทำได้จากเลือดและในกรณีที่มีอาการทางระบบประสาท (neuroborreliosis) จากน้ำไขสันหลัง
ไม่ควรทดสอบน้ำไขข้อเนื่องจากมีความเป็นไปได้สูงที่จะเกิดผลบวกที่ผิดพลาด
พื้นฐานสำหรับการวินิจฉัยโรคคืออาการทางคลินิกที่บ่งชี้ว่าได้รับการยืนยันจากผลการตรวจทางห้องปฏิบัติการ
การเพิ่มผลการตรวจทางห้องปฏิบัติการที่ไม่มีอาการไม่ได้เป็นการอนุญาตให้มีการวินิจฉัยโรค Lyme เนื่องจากพบว่ามีการตรวจพบแอนติบอดีต่อ Borrelia ในคนที่มีสุขภาพดี
การวินิจฉัยทางเซรุ่มวิทยาของ Lyme borreliosis เริ่มต้นด้วยการทดสอบ ELISA แบบคัดกรองแบบกึ่งปริมาณ หากผลลัพธ์เป็นลบแสดงว่าไม่พบ Borrelia spirochetes หรือผลลัพธ์เป็นลบเท็จ
หากผลลัพธ์เป็นบวกหรือผลบวกอย่างอ่อน (equivocal) ควรทำการทดสอบ Western blot เพื่อยืนยันซึ่งมีลักษณะเฉพาะเจาะจงสูง
นี่เป็นการยืนยันว่าผลลัพธ์ของ ELISA เป็น "จริง" ในระหว่างการวินิจฉัยคุณไม่สามารถข้ามขั้นตอนใด ๆ ข้างต้นและตัวอย่างเช่นทำการวินิจฉัยโดยใช้วิธี Western blot ทันทีหรือทำการวินิจฉัยโดยอาศัยผล ELISA ที่เป็นบวกเพียงอย่างเดียว
ในโปแลนด์การวินิจฉัยโรคลายม์มักจะจบลงในขั้นตอนการตรวจคัดกรองครั้งแรกซึ่งทำให้เกิดการตีความผลบวกหรือผลบวกที่ไม่ถูกต้อง
บทความแนะนำ:
Lymphocyte transformation test (LTT) คำแนะนำการทดสอบ ELISA - ราคา การทดสอบ ELISA มีค่าใช้จ่ายเท่าไร?
การทดสอบมีค่าใช้จ่ายประมาณ 60 PLN และทำได้ทันที อย่างไรก็ตามคุณสามารถรอผลการอ้างอิงได้ประมาณสามเดือน
การทดสอบ ELISA - ผลลัพธ์ เป็นผลบวกลวงได้หรือไม่?
ผลลัพธ์ที่ผิดพลาดเป็นผลมาจากปฏิกิริยาข้ามของแอนติบอดี IgM กับโปรตีนอื่น ๆ แอนติบอดีที่ร่างกายผลิตขึ้นอาจ 'ไม่ถูกต้อง' รับรู้แอนติเจนจากจุลินทรีย์อื่น ๆ ว่าเป็นแอนติเจนบอร์เรเลีย
"ความผิดพลาด" ที่พบบ่อยที่สุดเกิดขึ้นกับผู้ที่ติดเชื้อ Treponema pallidum, herpesviruses และในผู้ที่เป็น systemic lupus erythematosus และโรคไขข้ออื่น ๆ
การทดสอบ ELISA - ผลลัพธ์ พวกเขาสามารถลบเท็จได้หรือไม่?
ผลลบที่ผิดพลาดอาจปรากฏขึ้นในระยะเริ่มต้นของการติดเชื้อซึ่งในกรณีนี้ควรทำการทดสอบซ้ำหลังจากผ่านไปประมาณ 3-4 สัปดาห์ นี้เรียกว่า หน้าต่างทางเซรุ่มวิทยานั่นคือช่วงเวลาเริ่มต้นของการติดเชื้อที่ร่างกายยังไม่ได้ "จัดการ" เพื่อผลิตแอนติบอดีจำเพาะ
เช่นเดียวกับผู้ที่มีภาวะภูมิคุ้มกันบกพร่องที่ผลิตแอนติบอดีไม่เพียงพอ
ปัญหาใหญ่โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการติดเชื้อที่รุนแรงมากคือลักษณะของสิ่งที่เรียกว่า คอมเพล็กซ์ภูมิคุ้มกันที่ประกอบด้วยแอนติเจนบอร์เรเลียและแอนติบอดีจำเพาะสำหรับพวกมัน
เป็นผลให้แอนติบอดี "มองไม่เห็น" กับวิธีการที่ใช้กันทั่วไปเช่น ELISA และแม้ว่าจะมีอยู่ในวัสดุที่ผ่านการทดสอบ แต่ก็ไม่สามารถตรวจพบได้
ในกรณีเช่นนี้ห้องปฏิบัติการอาจใช้การทำลายคอมเพล็กซ์ภูมิคุ้มกัน การรักษานี้ออกแบบมาเพื่อปลดปล่อยแอนติบอดี อย่างไรก็ตามวิธีนี้ไม่ได้ใช้กันอย่างแพร่หลายเนื่องจากไม่มีมาตรฐานในห้องปฏิบัติการ
คุ้มค่าที่จะรู้ทำไมการวินิจฉัยโรคลายม์จึงไม่ใช่เรื่องง่าย?
นี่เป็นเพราะความซับซ้อนของการตอบสนองของภูมิคุ้มกันต่อ Borrelia และข้อ จำกัด ของวิธีการทางห้องปฏิบัติการ ความหลากหลายของพันธุ์และการเกิดขึ้นใหม่ที่ทำให้เกิดการติดเชื้อโดยเฉพาะอย่างยิ่งในทวีปยุโรปไม่อำนวยต่อการพัฒนาวิธีการวินิจฉัยที่มีประสิทธิภาพ
เมื่อเร็ว ๆ นี้มีพันธุ์อื่น ๆ ปรากฏขึ้นในยุโรปเช่น Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana และ Borrelia spielmanii นอกจากนี้ในร่างกาย Borrelia spirochetes สามารถเปลี่ยนเป็นซีสต์หรืออยู่ในสถานที่ที่ร่างกายไม่สามารถเข้าถึงเซลล์ของระบบภูมิคุ้มกันได้
ดังนั้นระบบภูมิคุ้มกันจึง "มองไม่เห็น" นอกจากนี้ยังแสดงให้เห็นว่าเนื้อเยื่ออาจมีชิ้นส่วนของแบคทีเรียที่มีคุณสมบัติกระตุ้นการอักเสบอย่างรุนแรง เชื่อกันว่าพวกเขามีส่วนรับผิดชอบต่ออาการเรื้อรังของโรค Lyme แม้ว่าผลการทดสอบในห้องปฏิบัติการจะเป็นลบก็ตาม
วรรณคดี
1. Witecka-Knysz E. et al. Lyme disease: ทำไมการวินิจฉัยจึงเป็นเรื่องยาก? นักวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการเมษายน 2550
2. Moore A. et al. แนวทางปัจจุบันข้อผิดพลาดทางคลินิกทั่วไปและทิศทางในอนาคตสำหรับการวินิจฉัยโรค Lyme ในห้องปฏิบัติการสหรัฐอเมริกา Emerg Infect Dis. 2559 ก.ค. ; 22 (7).
3. การตรวจวินิจฉัยโรคที่เกิดจากเห็บในห้องปฏิบัติการคำแนะนำของคณะทำงาน: National Chamber of Laboratory Diagnosticians, National Institute of Public Health-National Institute of Hygiene, ที่ปรึกษาแห่งชาติด้านโรคติดเชื้อ, Department of Infectious Diseases and Neuroinfections, Medical University of Białystok, Polish Society of Virology, Warsaw 2014
4. Hosseini S. et al .: Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) จาก A ถึง Z Springer 2017
